Improvement in the Thermal Stability of Pyrophosphatase by Conjugation to Poly(N-isopropylacrylamide): Applicatio to the Polymerase Chain Reaction
Yuecheng Cui, Feng Liu, Xin Li, Lei Wang, Hongwei Wang*, Gaojian Chen, Lin Yuan, John L. Brash, Hong Chen*. ACS Applied Materials and Interfaces, 2015, 7, 21913-21918.
文章链接:http://dx.doi.org/10.1021/acsami.5b06494

聚合酶链式反应(PCR)作为生物学领域的关键技术,因其自身反应存在的副产物焦磷酸根(PPi),降低了该反应的反应效率,而传统分解PPi的方法又无法适应PCR长时间的高温反应条件。本文利用聚合物-蛋白质偶联技术,在无机焦磷酸酶(PPase)的活性中心附近定位修饰上温敏性聚合物聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAM),形成PNI-PPase偶联物。PNIPAM的修饰不仅提高了PPase的最适反应温度,而且大大增强了其在高温条件下的耐受性。在PCR体系中,通过偶联物分解反应过程中的副产物PPi,在不影响反应特异性的情况下,达到显著促进PCR的效果。该技术不仅能在高温条件下促进诸如PCR等重要的生物学反应的进行,而且也为探索利用聚合物修饰蛋白质并提高其耐高温能力提供了可行的策略。





 

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